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载体构建——同源重组法-生命科学软件。还是以基因ATG7为例，首先在NCBI,TAIR等基因网站找到这个基因，复制CDS序列。将序列插入newdnafile，然后重命名文件。选中全长后，点击Features>addfeature>labelname改为CDS>type改为CDS。这样的目的是为了方便后续检测基因是否插入成功。查看实验室已有的酶，点击Emazy>chooseemazy>先移除右边框中的酶，然后再添加你所在实验室中已购买的酶。保存文件为ATG7.dna文件。后续要在载体中插入到这个文件所以要先保存。-生命科学软件。打开载体文件,找到到多酶切位点序列。查看哪些酶切位点可用且不会切到基因片段，然后确定酶切位点，可用一个酶，也可以用两个酶，不过比较好选两个酶。在载体文件中选择要两个酶切位点，点击Action>In-fusioncloning>Insertfragment。

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